【中文名稱】：NK自然殺傷細胞ELISA試劑盒

【英文名稱】：NK ELISA Kit

【產品規(guī)格】：96T/48T。

【保存條件】：2-8℃低溫保存

【保質期】：6個月，所有試劑盒均提供批次。

一、實驗前準備

儀器與耗材：提前校準移液器（誤差≤5%），準備酶標儀（檢測波長450nm）、37℃恒溫箱、高精度加樣器及對應槍頭、蒸餾水/去離子水。

試劑平衡：試劑盒從4℃冷藏環(huán)境取出后，需室溫平衡20~30分鐘；剩余未使用的板條應立即用自封袋密封，放回4℃保存。

樣品預處理：

血清/血漿：血液樣本1000×g離心10分鐘分離血清；EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝血漿需1000×g離心30分鐘去除顆粒。

細胞上清：1000×g離心10分鐘去除細胞碎片和聚合物。

組織勻漿：組織加入適量生理鹽水搗碎后，1000×g離心10分鐘取上清，分裝后-20℃/-80℃保存，避免反復凍融。

二、核心操作步驟

加樣：

設置空白孔、標準品孔和樣本孔，除空白孔外，標準品孔和樣本孔每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜密封反應孔。

加樣時避免產生氣泡，槍頭不可觸及孔壁，不同試劑/樣本需更換槍頭防止交叉污染。

孵育：37℃恒溫孵育60分鐘，孵育期間酶標板需平放，避免液體溢出和溫度波動。

洗滌：甩去孔內液體，每孔注滿洗滌液，浸泡30~60秒后甩干，重復洗滌3次，每次甩干后需在吸水紙上拍干，避免殘留液體。

顯色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘，此時孔內溶液會由無色變?yōu)椴煌潭鹊乃{色。

終止：每孔加入終止液50μL，終止液添加順序需與底物添加順序一致，溶液會由藍色變?yōu)辄S色；若出現(xiàn)綠色，需充分混勻后再讀數(shù)。

讀數(shù)：加終止液后15分鐘內，用酶標儀在450nm波長處測定各孔的OD值。

三、結果計算

以標準品濃度為橫坐標、對應OD值為縱坐標繪制標準曲線，推薦使用CurveExpert等專業(yè)軟件選擇四參數(shù)方程擬合，將樣品OD值代入方程即可計算出對應濃度。樣品需設置復孔/三孔，復孔變異系數(shù)應小于20%。

四、注意事項

標準品需分裝后-20℃保存，嚴禁反復凍融；洗滌液需現(xiàn)用現(xiàn)配。

若所有孔均無明顯顏色，需檢查試劑是否混淆、酶標物是否失活、是否遺漏操作步驟。

若背景顏色過深，通常與洗滌不充分、試劑污染、顯色時間過長有關。